雷丸提取液及伍用吡喹酮对小鼠U14腹水癌的抑制作用

实验观察雷丸提取液(OLS)对小鼠U_(14)腹水癌的抑制作用。结果:给腹水癌鼠ipOLS后、生命延长率达82％;OLS伍用吡喹酮注射液ip生命延长率达182％。单用OLS和伍用吡喹酮均有防止胸腺萎缩及调节外周血T淋巴细胞的作用。提示:OLS对小鼠U_(14)腹水癌有明显抑制作用。     

PVP荷载雷丸蛋白诱导人胃癌细胞MC-4的凋亡作用

目的:研究雷丸蛋白对人胃癌细胞MC-4凋亡的诱导作用。方法:以聚乙烯吡咯烷酮(PVP)为溶剂提取雷丸饮片蛋白质,BCA法测定蛋白浓度后以DMEM培养液稀释到180mg.mL-1,120mg.mL-1,90mg.mL-1,60mg.mL-1和45 mg.mL-1,体外作用于胃癌细胞MC-4,37℃、5%CO2条件下培养18h后,光镜检查作用结果。以Hoechst 33258染色后于荧光显微镜下观察细胞凋亡情况,以Annexin V-PI双染色后以流式细胞仪检查细胞的死亡和凋亡情况。结果:随着蛋白质用量的增加,MC-4细胞死亡率与剂量间呈现量效关系,180mg.mL-1时达最高值29.6%。凋亡率和剂量间呈现较好的剂量-效应曲线,120mg.mL-1时凋亡率最高,可达29.4%,聚乙烯吡咯烷酮无作用。结论:PVP荷载雷丸蛋白对人胃癌细胞MC-4有很好的杀伤作用和诱导凋亡作用,杀伤机理和凋亡机理有待深入研究。     

雷丸中16种氨基酸的柱前衍生化RP-HPLC法含量测定

目的:测定雷丸中16种氨基酸的含量。方法:样品以6 mol.L-1盐酸于150℃水解1 h,以异硫氰酸苯酯(PITC)为衍生化试剂衍生后进行HPLC分析。采用Phenomenex Luna C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,柱温为43℃;流动相A为0.1mol.L-1醋酸钠缓冲液(以醋酸调pH 6.5)-乙腈(93∶7),流动相B为乙腈-水(4∶1),梯度洗脱,流速为1.0 mL.min-1;检测波长为254 nm。结果:16种氨基酸浓度在1.16～47.32μg.mL-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9998～1.000);平均回收率在93.3%～107.2%之间;RSD均小于3.0%。结论:本方法灵敏、准确,具有良好的重复性和稳定性,可用于雷丸中氨基酸的检测。     

雷丸蛋白酶的发酵、提取及对猪囊尾蚴体外活性作用的初步研究

目的：探索雷丸菌发酵产物中是否含有和天然雷丸中相同分子量的而且具有体外杀灭猪囊尾蚴活性的雷丸蛋白酶。方法：对雷丸菌发酵所产生的蛋白酶进行提取、检测和体外杀灭猪囊尾蚴的实验，并和天然雷丸蛋白酶进行比较。结果：从雷丸菌发酵产物中分离出来的雷丸蛋白酶经测定，分子量为１６８００，等电点为４．４，末端氨基酸为缬氨酸，具有水解蛋白的活力及体外杀灭猪囊尾蚴的活性。结论：采用雷丸菌发酵方法所获得的雷丸蛋白酶与天然雷丸蛋白酶之间没有明显差别。     

雷丸蛋白酶的发酵、提取及对猪囊尾蚴体外活性作用的初步研究

 目的:探索雷丸菌发酵产物中是否含有和天然雷丸中相同分子量的而且具有体外杀灭猪囊尾蚴活性的雷丸蛋白酶。方法:对雷九菌发酵所产生的蛋白酶进行提取、检测和体外杀灭猪囊尾蚴的实验，并和天然雷九蛋白酶进行比较。结果:从雷九菌发酵产物中分离出来的雷九蛋白酶经测定，分子量为16 800，等电点为4.4，末端氨基酸为缬氨酸，具有水解蛋白的活力及休外杀灭猪囊尾蚴的活性。结论:采用雷九菌发酵方法所获得的雷九蛋白酶与天 然雷九蛋白酶之间没有明显差别。     

雷丸药材中多糖及总糖定量分析方法研究

目的建立雷丸药材中多糖及总糖的定量分析方法。方法运用硫酸苯酚-紫外分光光度法对雷丸药材中多糖及总糖成分进行含量测定,490（±2）nm的波长处测定吸收度。结果本方法对13批雷丸药材中多糖的含量以D-无水葡萄糖计为0.30%~1.02%,总糖的含量为0.03%~0.54%。结论本方法操作简单,重复性好,结果准确可靠,可用于雷丸药材中多糖及总糖的含量测定。     

药用真菌雷丸菌丝冻干粉对小鼠的毒性实验研究

目的：研究雷丸菌丝冻干粉的急性毒性作用。方法：通过深层液体发酵获取雷丸菌丝并进行真空冷冻干燥,以高、中、低3个剂量组对ICR小鼠进行灌胃,采用一次性给药方式给药,连续观察14天。实验结束后取血清,测ALT和AST,取肝、心、脾、肺、肾5脏器进行石蜡病理切片检查。结果：各实验组均未见小鼠死亡,但用药组小鼠表现行为异常。病理切片显示,与对照组相比,用药组小鼠脾脏有极轻微病变,但未见细胞坏死;其余脏器未见异常。AST和ALT分析显示,各处理组间未见显著性差异。结论：雷丸菌丝冻干粉对小鼠有极轻微毒性,仍需进一步研究以确定毒性的原因。     

理化因素及栽培基质对雷丸菌丝生长的影响

目的明确雷丸菌丝生长的影响因素,为人工栽培提供依据。方法在不同温度、碳源、氮源、p H、培养基质等培养条件下测定雷丸菌丝日生长量。结果 25℃、p H 6.0~7.0条件下菌丝生长快;1%~3%的碳源,菌丝生长速率差异不显著;蛋白胨、酵母粉等氮源对菌丝生长有抑制作用,玉米粉无抑制;竹叶为雷丸栽培种较适宜的栽培主料,玉米粉的促生长作用明显。结论温度、氮源和基质对雷丸菌丝生长的影响较明显。     

雷丸蛋白酶体外抗猪囊尾蚴组织学变化的观察

目的：寻找一种高效、低毒和价廉的杀虫药物，特别是在中草药中发掘有效杀囊虫药。方法：采用人工发酵雷丸菌（ ＯｍｐｈａｌｉａｌａｐｉｄｅｓｃｅｎｓＳｃｈｒｏｅｔｅｒ）蛋白酶进行体外杀囊虫试验，并制成石蜡切片，Ｈ．Ｅ．染色后，作镜检，观察其组织结构的变化情况。结果：雷丸蛋白酶对猪囊尾蚴大体形态、组织结构均有明显的破坏作用，可侵入实质细胞层。结论：证实了雷丸蛋白酶是杀囊虫的有效成分。